Autoasociación de la proteína p6 del bacteriófago [phi] 29 de Bacillus subtilis

Resumen

En este trabajo se ha estudiado la autoasociación de la proteina p6 del bateriófago 029 de Bacillus subtilis desde dos puntos de vista, estructural y funcional. A nivel estructural hemos descrito que la proteina p6 en solucion y en el intervalo de concentracion entre 1 y 100 uM, se encuentra en un equilibrio monomero-dimero con una constante de dimerización de 2,0x10 5 M-1. Sin embargo, a concentraciones cercanas a las encontradas in vivo(1 mM), los dímeros pueden autoasociar para formar oligomeros, con una constante de unión de 0,95 x 10 3 M-1. A menor temperatura y a mayor fuerza iónica la proteína p6 autoasocia mejor, lo que indica que las fuerzas predominantes que intervienen en la autoasociación son, probablemente,puentes de hidrogeno y/o fuerzas de van der Waals. Los oligómeros que forma la proteína p6 se observan al microscopio electrónico de transmisión de forma alargada y curva, y sus medidas son comparables a las del DNA en el complejo previamente descrito. Se sugiere que estos agregados sean la unidad minima de estabilización del complejo proteina p6-DNA, y que esten formados por 7 u 8 dimeros de proteina. En ausencia de DNA, la proteina p6 puede formar filamentos a derechos, probablemente mediante un proceso de nucleación a partir de los agregados alargados y curvos. Desde el punto de vista estructural hemos descrito regiones de la proteina implicadas tanto positiva como negativamente en la dimerización. El extremo carboxilo terminal de la proteina dificulta la autoasociación de la proteína p6 in vitro, por lo que se ha propuesto como modulador de este mecanismo. La proteina p6 autoasocia in vivo; parecen existir dos regiones implicadas, el extremo amino y una region central. La caracterización de mutantes puntales en cada una de las regiones implicadas en la autoasociación de la proteina p6 in vivo,ha permitido determinar que la isoleucina en posición 8 es critica para la dimerización de la proteina p6