Evolucion de la pluripotencialidad durante el cultivo y diferenciacion in vitro de celulas madre embrionarias de raton

Resumen

En la presente tesis se han estudiado cuatro aspectos fundamentales y de importancia para la futura posible aplicación terapéutica de las células madre embrionarias. En primer lugar queda demostrado como durante el cultivo in vitro prolongado de las células madre embrionarias, y a pesar de mantener unas condiciones optimas para su expansión indiferenciada, estas células sufren cambios morfológicos asociados a variaciones genéticas por las cuales ven disminuido su potencial, derivando en un cultivo heterogéneo donde sólo unas pocas células se mantienen totalmente indiferenciadas y el resto queda parcialmente diferenciado o con una capacidad de diferenciación reducida, conforme a lo que puede observarse por los marcadores específicos de pluripotencialidad. En segundo lugar se muestra como mediante el uso de una construcción genética, que relaciona la expresión endógena de uno de los marcadores más específicos de las células madre embrionarias indiferenciadas, el OCT-4, con la expresión de la proteína verde fluorescente (eGFP), puede visualizarse fácilmente la composición y potencial de los cultivos de las células madre. Es más, pueden incluso seleccionarse aquellas células que, a pesar del cultivo prolongado, hayan mantenido su gran potencial diferenciador invariable. De esta manera se generan cultivos totalmente homogéneos con el mismo, o al menos muy parecido, potencial y propiedades como las que cabrían esperar de un cultivo celular recién generado o aislado. Estos cultivos mantienen dichas características invariables, a lo largo de los pases, de manera más eficiente que los cultivos comerciales y sin llegar a sufrir pérdidas de potencial. El uso de estas células modificadas con la construcción empleada más arriba, nos permiten describir de manera muy eficiente, los caminos seguidos por las células madre embrionarias durante el proceso de diferenciación in vitro, mediante la formación de agregad