Caracterizacion espectroscopica y estructural de biliproteinas procedentes de spirulina platensis. Aplicaciones como marcadores fluorescentes

Resumen

Se han purificado las biliproteinas presentes en la microalga spirulina platensis: c-pc y apc. Se han separado eficazmente las subunidades que las constituyen en condiciones de desnaturalizacion, por cromatografia de hplc en fase reversa, lo que ha permitido corroborar la pureza, anteriormente comprobada por espectrofotometria y sds-page. Se ha obtenido y purificado el cromoforo ficocianobilina, unico presente en ambas biliproteinas, mediante metanolisis y posterior extraccion con disolventes organicos, habiendose demostrado su mediantehplc en fase revesa. Mediante el metodo de acupuntura en gelse han cristalizado ambas biliproteinas. La calidad de los cristales obtenidos ha permitido su caracterizacion mediante difraccion de rayos-x. Los cristales de ambas proteinas pertenecen al sistema hexagonal. C-pc al grupo espacial p6 o p63 mientras que para apc se ha asignado el grupo p6322, habiendose determinado sus parametros de red. Las propiedades espectroscopicas de absorcion y emision de ambas biliproteinas no se alteran apreciablemente en los intervalos de temperatura y ph comprendidos entre 30-50 grados c y 4-9 respectivamente. Mediante espectroscopia ft-ir se ha determinado la estructura secundaria de la biliproteinas en disolucion. Los espectros de polarizacion de fluorescencia muestran la existencia de distintos tipos funcionales de cromoforos. Si se admite la existencia de cromoforos sensibilizantes y fluorescentes, se puede deconvolucionar el espectro deabsorcion de las biliproteinas demostrando la eficaz transferencia de energia cuando ambas biliproteinas se encuentran en estado de agregacion trimerico. Mediante una sencilla metodologia se ha modificado el acido polirribocitidilico poli (c) y se ha unido a el mediante conjugacion efectiva la biliproteina correspondiente. Los conjugados obtenidos son de utilidad en la deteccion fluorimetrica de la hibridacion con acido polirriboinosinico poli (i). Referida hibridacion se p