Desarrollo de vectores lentivirales para terapia génica de la infección por VIH-1

Resumen

Desarrollo de Vectores Lentivirales para Terapia Génica de la Infección por VlH-1. El SIDA se ha convertido en una enfermedad crónica, que puede ser contenida mediante el uso de potentes terapias antirretrovirales, si bien producen importantes efectos secundarios, además de no ser económicamente accesibles para muchos países subdesarrollados o en vías de desarrollo. La evolución experimentada de las técnicas genéticas y moleculares aplicadas al campo de la biomedicina ha permitido a los investigadores progresar en la búsqueda de nuevas estrategias de terapia génica para combatir la infección por VIH-1. No obstante, es necesario seguir trabajando para generar nuevos vectores de terapia génica que sean capaces de regular la expresión del transgén de manera fisiológica, dirigirse específicamente a su célula diana e incrementar su bioseguridad. En esta tesis se han desarrollado dos vectores lentivirales para terapia génica de la infección por VIH-1 desde dos puntos de vista claramente diferenciados y que suponen el inicio de futuros estudios en este complicado y apasionante campo. VECTOR LENTIVIRAL p5p53RTAT3A PARA TERAPIA GÉNICA EN LA INFECCIÓN LATENTE POR VIH-1. Las terapias antirretrovirales conocidas como HMRT han conseguido reducir los niveles de VIH-1 en plasma por debajo del límite de detección de las pruebas clinicas. A pesar de este potente bloqueo ejercido en la replicación del VIH-1 por los actuales cócteles de antirretrovirales, son incapaces de eliminar completamente al virus y están lejos de ser una cura real para los pacientes infectados, produciéndose un incremento en la viremia tras su retirada. Existen por lo tanto reservónos virales que no se ven expuestos al efecto antirretroviral de la terapia HAART. Estos reservónos virales los constituyen principalmente los linfocitos T CD4+ de memoria, los cuales albergan provirus transcripcionalmente silentes pero con capacidad para reactivarse y que pueden permanecer durante toda la vida del paciente. Por lo tanto, la necesidad de buscar nuevas estrategias dirigidas a acabar con el reservorio de virus latentes es evidente. En la primera parte de este trabajo de tesis hemos desarrollado un vector lentiviral con el objetivo de reactivar a los provirus latentes a través de la sobreexpresión de tal y de matar a la célula que los alberga mediante la sobre-expresión de p53 regulada por Rev. Los resultados obtenidos demuestran que este vector podría ser útil en un esquema de terapia génica enfocado a reactivar provirus latentes, haciendo que las células infectadas latentemente sean visibles al sistema inmune y a las HAART, provocando su eliminación, como una vía de acabar con el reservorio de VIH-1 latente. VECTOR LEIMTIVIRAL pS!IMTp53R PARA GENERAR LINFOCITOS T CD4± RESISTENTES A LA INFECCIÓN POR V1H-1. Los esfuerzos realizados desde la entrada en escena del ViH-1 para comprender la regulación de su expresión génica asi como la función de cada una de sus proteínas, ha permitido que desde mediados de los años 90 apareciesen diferentes estrategias de terapia génica para suprimir la infección o la replicación del VIH-1. Los resultados obtenidos in vitro indicaban que el objetivo de conseguir células resistentes al VIH-1 que tengan una ventaja selectiva para su supervivencia se podía alcanzar, aunque los datos procedentes de ensayos clinícos no son tan alentadores. La aparición de las HAART revolucionó la historia natural de la infección y en parte oscureció la necesidad de buscar terapias alternativas. Sin embargo, a pesar del entusiasmo inicial provocado por las HAART, actualmente hay que tener en cuenta que no son capaces de acabar con la enfermedad y que su administración prolongada compromete la salud de la persona. Por tanto, el desarrollo de estrategias alternativas contra el VIH-1 que puedan tener éxito en la clínica, ha vuelto a poner a la terapia génica en primer plano. En la segunda parte de este trabajo de tesis, hemos construido un vector lentiviral (pSINTp53R) con el objetivo de generar células resistentes a la infección por VIH-1 que pudieran tener una ventaja selectiva para su supervivencia, repoblando el sistema inmune. La construcción del vector pSINTp53 constituye la base para el ensayo de diferentes sistemas que consigan bloquear la infección de la célula, bien bloqueando la entrada o algún punto del proceso de migración al núcleo e integración en el genoma celular. Además, supone un avance importante en el desarrollo de una estrategia de terapia génica para en el futuro, modificar células madre hematopoyéticas de modo que su progenie sea resistente a la infección por VIH-1.